bioselБиотехнология и селекция растенийPlant Biotechnology and Breeding2658-62662658-6258VIR10.30901/2658-6266-2022-1-o2biosel-148Research ArticleСОХРАНЕНИЕ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ РАСТЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БИОТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПОДХОДОВCONSERVATION OF PLANT GENETIC RESOURCES USING BIOTECHNOLOGICAL APPROACHESКриоконсервация сортов малины отечественной селекции из коллекции in vitro ВИРCryopreservation of raspberry cultivar accessions bred in Russia from the VIR in vitro collectionhttps://orcid.org/0000-0001-8103-2191КамневА. М.KamnevA. M.

Антон Михайлович Камнев

младший научный сотрудник, Отдел биотехнологии, ВИР, 190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Anton M. Kamnev

Associate Researcher, Department of Biotechnology, VIR, 42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

antonkamen@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7002-8066ДунаеваС. Е.DunaevaS. E.

Светлана Ефимовна Дунаева

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник, Отдел биотехнологии, ВИР, 190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Svetlana E. Dunaeva

Cand. Sci. (Biology), Senior Researcher, Department of Biotechnology, VIR, 42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

dunaevase@mail.ruВолковаН. Н.VolkovaN. N.

Наталия Николаевна Волкова

ведущий специалист, Отдел биотехнологии, ВИР, 190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Natalia N. Volkova

Leading Specialist, Department of Biotechnology, VIR, 42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

nata.volckova@yandex.ruЛисицынаО. В.LisitsynaO. V.

Ольга Владимировна Лисицына

специалист, Отдел биотехнологии, ВИР, 190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Olga V. Lisitsyna

Specialist, Department of Biotechnology, VIR, 42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

olgalis86@yandex.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2605-6569ГавриленкоТ. А.GavrilenkoT. A.

Татьяна Андреевна Гавриленко

доктор биологических наук, главный научный сотрудник, заведующая отделом, Отдел биотехнологии, ВИР, 190000 Россия, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Tatjana A. Gavrilenko

Dr. Sci. (Biology), Chief Researcher, Head, Department of Biotechnology, VIR, 42, 44 Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000, Russia

tatjana9972@yandex.ruФедеральный исследовательский центр Всероссийский институт генетических ресурсов растений имени Н.И. ВавиловаN.I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic Resources202212042022511727Copyright © Камнев А.М., Дунаева С.Е., Волкова Н.Н., Лисицына О.В., Гавриленко Т.А., 20222022Камнев А.М., Дунаева С.Е., Волкова Н.Н., Лисицына О.В., Гавриленко Т.А.Kamnev A.M., Dunaeva S.E., Volkova N.N., Lisitsyna O.V., Gavrilenko T.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://biosel.elpub.ru/jour/article/view/148

В генетических банках растений криоколлекции используются для длительного хранения культур, которые не могут сохраняться в семенных коллекциях. К ним относятся вегетативно размножаемые культуры, образцы видов, формирующих малое число семян или имеющих рекальцитрантные семена. Для криосохранения большинства ягодных культур используют апексы побегов пробирочных растений, поэтому определяющим этапом для них является наличие in vitro коллекции. В коллекции in vitro ВИР сохраняется 150 образцов рода Rubus L., из них 85 сортов малины, в том числе 59 отечественной селекции. Эти сорта характеризуются широким эколого-географическим разнообразием. Среди них имеются сорта малины, созданные в конце XIX века – первой половине XX века, в том числе селекции И.В. Мичурина и основоположника северного садоводства В.В. Спирина. Более половины образцов отечественных сортов малины (33 сорта) числятся в Государственном реестре селекционных достижений, допущенных к использованию. Собранный в in vitro коллекции ВИР сортимент малины российской селекции ограниченно представлен в зарубежных генбанках. Задача данной работы заключалась в криоконсервации образцов сортов малины преимущественно народной и старой российской селекции, поступивших в ВИР в период с 1925 по 1950 год, а также мониторинг посткриогенной регенерационной способности у сортов малины, ранее заложенных в криобанк ВИР. Замораживание при сверхнизких температурах апексов микрорастений проводили у 10 сортов малины из in vitro коллекции ВИР (7 из которых относятся к сортам народной и старой российской селекции) с использованием оптимизированного ранее протокола дроплет-витрификации – «DV-biotech». В криобанк ВИР на длительное хранение передано 10 образцов сортов малины (900 апексов) со средним уровнем посткриогенной регенерации 38,2 ± 3,0, определенным в контрольных экспериментах перед закладкой на длительное хранение в криобанк. Отмечено статистически значимое влияние генотипа на жизнеспособность эксплантов после криоконсервации, в то время как статистически значимого влияния генотипа на посткриогенную регенерацию эксплантов не обнаружено. Дополнительно у 17 сортов малины, хранившихся в криобанке от одного до пяти лет, оценивали уровень посткриогенной регенерации. Из 17 проверенных образцов сортов малины (296 апексов) посткриогенная регенерация на уровне 20%–70% была выявлена у всех четырех сортов, сохраняемых в криобанке в течение одного года, и на уровне 10%–50% у оставшихся восьми сортов с более длительным сроком криохранения в криобанке – от трёх до пяти лет. По результатам проведенного мониторинга отмечена регенерация у 12 сортов малины на уровне от 10% до 70%. Эти сорта можно считать надёжно сохраняемыми в парах жидкого азота в криобанке ВИР. Мониторинг посткриогенной регенерации образцов малины, хранящихся в криобанке ВИР, и криоконсервация новых сортов малины будут продолжены.

Cryobanks use plant cryocollections for long-term preservation of crops which cannot be preserved in seed collections. These are vegetatively propagated crops, accessions of species which form either a small amount of seeds, or recalcitrant seeds. Shoot tips (apexes) of in vitro plants are used for cryopreservation for most berry crops, therefore maintenance of in vitro collections is very important. The VIR in vitro collection includes 150 accessions of Rubus L. species, 85 of them are raspberry cultivars, 59 of which were bred in Russia. These cultivars reflect a wide ecogeographic diversity. Among them, there are raspberry cultivars created at the end of the 19th – first half of the 20th centuries, including cultivars bred by I.V. Michurin and by the pioneer of northern horticulture V.V. Spirin. More than half of national raspberry varieties (33) are listed in the State Register for Selection Achievements Admitted for Usage. Raspberry cultivars from Russian breeding programs have a very limited representation in foreign genebanks. The first aim of the present work was cryopreservation of mostly folk and old Russian raspberry cultivars received by VIR from 1925 till 1950 and their transfer into the cryobank. The second aim of the work was to monitor post-cryogenic regeneration of raspberry cultivars transferred to the cryobank earlier. A modified protocol of the droplet vitrification method by “DV-biotech” was used for cryopreservation of shoot tips of in vitro plants of 10 raspberry cultivars (7 of which are folk and old Russian ones) from the VIR in vitro collection. Post-cryogenic regeneration was evaluated for 17 raspberry cultivars preserved in the cryobank from one to five years. Ten raspberry cultivars (900 apexes) with an average mean post-cryoregenic regeneration value of 38.2±3.0% determined in control tests, were placed in the cryobank for long-term storage. A statistically significant effect of the genotype on the viability of explants after cryopreservation was noted, while the post-cryogenic regeneration was genotype insensitive. Additionally, levels of post-cryogenic regeneration were evaluated for 17 raspberry cultivars (296 apexes) preserved in the cryobank from one to five years. Post-cryogenic regeneration within the 20-70% range was displayed by four raspberry cultivars preserved in the cryobank for one year, and for 8 cultivars conserved there from three to five years post-cryogenic regeneration was within the 10-50% range. According to the results of monitoring, regeneration displayed by 12 raspberry cultivars was within the 10-70% range, which can be considered as a reliable rate of apex preservation in liquid nitrogen vapors in the VIR cryobank. Monitoring of the post-cryogenic regeneration of the raspberry accessions preserved in the VIR cryobank and cryopreservation of new raspberry cultivars will be continued.

Rubus idaeus L.сортакриоконсервацияпосткриогенная регенерациякриобанккриосохранениеRubus idaeus L.cultivarscryobankpost cryogenic regenerationcryopreservationРабота выполнена в рамках государственного задания ВИР согласно тематическому плану НИР по теме № 0481–2022-0004. Авторы выражают благодарность сотруднику ВИР к. б. н. П.В. Озерскому за консультацию и помощь при статистической обработке материала.The article was prepared as part of the VIR State Assignment in accordance with the R&D Thematic Plan, Topic No. 0481–2022-0004 “The study of genetic resources of cultivated plants, their wild relatives and created forms using a complex of modern methods of DNA diagnostics” and No. 0662-2019-0004 “VIR Collections of vegetatively propagated crops (potatoes, fruits, berries, ornamental crops, grapes) and their wild relatives; their study and rational useˮ. The authors express gratitude to research scientist PhD P.V. Ozerskiy for his advice and assistance in statistical data analysis.ReferencesАнтонова О.Ю., Дунаева С.Е., Ухатова Ю.В., Камылина Н.Ю., Долганова Н.А., Лисицына О.В., Гавриленко Т.А. Оздоровление малины от вируса кустистой карликовости (rbdv) методом комплексной терапии в культуре in vitro. Достижения науки и техники АПК. 2015;29(7):61-64.Antonova O. Y., Dunaeva S.E., Ukhatova Yu. V., Kamylina N. Y., Dolganova N.A., Lisicyna O.V., Gavrilenko T.A. In vitro improvement of raspberry varieties from raspberry bushy dwarf virus (RBDV) using complex therapy method. Research and Technical Advances of Agribusiness Sector. 2015;29(7):61-64. [In Russian].Chang Y., Reed B.M. Extended cold acclimation and recovery medium alteration improve regrowth of Rubus shoot tips following cryopreservation. CryoLetters. 1999;20(6):371-376.Chang Y., Reed B.M. Extended cold acclimation and recovery medium alteration improve regrowth of Rubus shoot tips following cryopreservation. CryoLetters. 1999;20(6):371-376.Condello E., Rŭzić D., Panis B., Caboni E. Raspberry cryopreservation by droplet vitrification technique. Acta Horticulture. 2011;918:965-969. DOI: 10.17660/ActaHortic.2011.918.127Condello E., Rŭzić D., Panis B., Caboni E. Raspberry cryopreservation by droplet vitrification technique. Acta Horticulture. 2011;918:965-969. DOI: 10.17660/ActaHortic.2011.918.127Дунаева С.Е., Красовская Л.С., Гавриленко Т.А. Сохранение генетических ресурсов рода Rubus (Rosaceae) ex situ. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2022;183(1):236-253. DOI: 10.30901/2227-8834-2022-1-236-253Dunaeva S.E., Krasovskaya L.S., Gavrilenko T.A. Ex situ conservation of biological resources of the genus Rubus (Rosaceae). Proceedings on applied botany, genetics and breeding. 2022;183(1):236-253. [In Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2022-1-236-253Дунаева С.Е., Пендинен Г.И., Антонова О.Ю., Швачко Н.А., Ухатова Ю.В., Шувалова Л.Е., Волкова Н.Н., Гавриленко Т.А. Сохранение вегетативно размножаемых культур в in vitro и крио коллекциях: методические указания / под редакцией Т.А. Гавриленко. 2-е изд. Санкт-Петербург: ВИР; 2017.Dunaeva S.E., Pendinen G.I., Antonova O.Y., Shvachko N.A., Ukhatova Y.V., Shuvalova L.E. Volkova N.N., Gavrilenko T.A. Preservation of vegetatively propagated crops in in vitro and cryo–collections: methodological guidelines. (Sokhraneniye vegetativno razmnozhayemykh kultur v in vitro i krio kollektsiyakh: metodicheskiye ukazaniya). T.A. Gavrilenko (ed.). 2nd ed. St. Petersburg: VIR; 2017. [in Russian].Дунаева С.Е., Рокко Г.С. Каталог мировой коллекции ВИР. Выпуск 899. Коллекция in vitro малины и ежевики (Rubus L., Rosaceae). Санкт-Петербург: ВИР; 2019.Dunaeva S.E., Rokko G.S. Catalogue of the VIR global collection. Issue 899. In vitro collection of raspberries and blackberries (Rubus L., Rosaceae). St. Petersburg: VIR; 2019. [in Russian].Edesi J., Tolonen J., Ruotsalainen A.L., Aspi J., Häggman H. Cryopreservation enables long-term conservation of critically endangered species Rubus humulifolius. Biodiversity and Conservation. 2020;29(1):303-314. DOI: 10.1007/s10531-019-01883-9Edesi J., Tolonen J., Ruotsalainen A.L., Aspi J., Häggman H. Cryopreservation enables long-term conservation of critically endangered species Rubus humulifolius. Biodiversity and Conservation. 2020;29(1):303-314. DOI: 10.1007/s10531-019-01883-9Gupta S., Reed B.M. Cryopreservation of shoot tips of blackberry and raspberry by encapsulation-dehydration and vitrification. CryoLetters. 2006;27(1);29-42.Gupta S., Reed B.M. Cryopreservation of shoot tips of blackberry and raspberry by encapsulation-dehydration and vitrification. CryoLetters. 2006;27(1);29-42.Hammer Ø., Harper D.A., Ryan P.D. PAST: Paleontological statistics software package for education and data analysis. Palaeontologia electronica. 2001;4(1):1-9.Hammer Ø., Harper D.A., Ryan P.D. PAST: Paleontological statistics software package for education and data analysis. Palaeontologia electronica. 2001;4(1):1-9.Höfer M., Flachowsky H., Hanke M.-V. German Fruit Genebank – looking back 10 years after launching a national network for sustainable preservation of fruit genetic resources. Journal für Kulturpflanzen. 2019;71(2/3):41-51. DOI: 10.5073/JfK.2019.02-03.01Höfer M., Flachowsky H., Hanke M.-V. German Fruit Genebank – looking back 10 years after launching a national network for sustainable preservation of fruit genetic resources. Journal für Kulturpflanzen. 2019;71(2/3):41-51. DOI: 10.5073/JfK.2019.02-03.01Jenderek M.M., Reed B.M. Cryopreserved storage of clonal germplasm in the USDA National Plant Germplasm System. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2017;53(4):299-308. DOI: 10.1007/s11627-017-9828-3Jenderek M.M., Reed B.M. Cryopreserved storage of clonal germplasm in the USDA National Plant Germplasm System. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2017;53(4):299-308. DOI: 10.1007/s11627-017-9828-3Казаков И.B., Айтжанова С.Д., Евдокименко С.Н., Сазонов Ф.Ф., Кулагина В.Л., Андронова Н.В. Ягодные культуры в Центральном регионе России. 2-е изд. Москва; 2016.Kazakov I.V., Aytzhaniva S.D., Evdokimenko S.N., Sazonov F.F., Kulagina V.L., Andronova N.V. Berry crops in the Central region of Russia (Yagodnyye kul'tury v Tsentral'nom regione Rossii). 2nd ed. Moscow; 2016. [In Russian].Кобзарь А.И. Прикладная математическая статистика. Москва: Физматлит; 2006.Kobzar A.I. Applied mathematical statistics (Prikladnaya matematicheskaya statistika). Moscow: Fizmatlit; 2006. [In Russian].Каталог мировой коллекции ВИР. Выпуск 186. Полевая устойчивость земляники, малины и ежевики к основным заболеваниям / под редакцией В.И. Кривченко. Ленинград: ВИР; 1976.Krivchenko V.I. (ed.) Catalogue of the VIR global collection. Issue 186. Strawberry, raspberry and blackberry field resistance for main diseases (Katalog mirovoy kollektsii VIR. Vypusk 186. Polevaya ustoychivost’ zemlyaniki, maliny I ezheviki k osnovnym zabolevaniyam). Leningrad: VIR; 1976. [In Russian].Kovalchuk I., Turdiev T., Kushnarenko S., Rakhimbaev I., Reed B.M. Cryopreservation of raspberry cultivars: Testing Techniques for Long-Term Storage of Kazakhstan’s Plant Germplasm. The Asian and Australasian Journal of Plant Science and Biotechnology. 2010;4(1):1-4.Kovalchuk I., Turdiev T., Kushnarenko S., Rakhimbaev I., Reed B.M. Cryopreservation of raspberry cultivars: Testing Techniques for Long-Term Storage of Kazakhstan’s Plant Germplasm. The Asian and Australasian Journal of Plant Science and Biotechnology. 2010;4(1):1-4.Nukari A., Uosukainen M., Rokka V.M. Cryopreservation techniques and their application in vegetatively propagated crop plants in Finland. Agricultural and food science. 2009;18(2):117-128. DOI: 10.2137/145960609789267506Nukari A., Uosukainen M., Rokka V.M. Cryopreservation techniques and their application in vegetatively propagated crop plants in Finland. Agricultural and food science. 2009;18(2):117-128. DOI: 10.2137/145960609789267506Panis B., Nagel M., Van den Houwe I. Challenges and prospects for the conservation of crop genetic resources in field genebanks, in in vitro collections and/or in liquid nitrogen. Plants. 2020;9(12):1634. DOI: 10.3390/plants9121634Panis B., Nagel M., Van den Houwe I. Challenges and prospects for the conservation of crop genetic resources in field genebanks, in in vitro collections and/or in liquid nitrogen. Plants. 2020;9(12):1634. DOI: 10.3390/plants9121634Popova E., Shukla M., Kim H.H., Saxena P.K. Plant cryopreservation for biotechnology and breeding. In: Al-Khayri J.M., Jain S.M., Johnson D.V. (eds.) Advances in plant breeding strategies: breeding, biotechnology and molecular tools. Cham: Springer; 2015. p.63-93. DOI: 10.1007/978-3-319-22521-0_3Popova E., Shukla M., Kim H.H., Saxena P.K. Plant cryopreservation for biotechnology and breeding. In: Al-Khayri J.M., Jain S.M., Johnson D.V. (eds.) Advances in plant breeding strategies: breeding, biotechnology and molecular tools. Cham: Springer; 2015. p.63-93. DOI: 10.1007/978-3-319-22521-0_3Rantala S., Kaseva J., Nukari A., Laamanen J., Veteläinen M., Häggman H., Karhu S. Successful cryopreservation of dormant buds of blackcurrant (Ribes nigrum L.) by using greenhouse-grown plants and in vitro recovery. Plants. 2021;10(7):1414. DOI: 10.3390/plants10071414Rantala S., Kaseva J., Nukari A., Laamanen J., Veteläinen M., Häggman H., Karhu S. Successful cryopreservation of dormant buds of blackcurrant (Ribes nigrum L.) by using greenhouse-grown plants and in vitro recovery. Plants. 2021;10(7):1414. DOI: 10.3390/plants10071414Reed B.M. Cold acclimation as a method to improve survival of cryopreserved Rubus meristems. CryoLetters. 1988;9(3):166-171.Reed B.M. Cold acclimation as a method to improve survival of cryopreserved Rubus meristems. CryoLetters. 1988;9(3):166-171.Reed B.M. Improved survival of in vitro-stored Rubus germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 1993;118(6):890-895. DOI: 10.21273/JASHS.118.6.890Reed B.M. Improved survival of in vitro-stored Rubus germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 1993;118(6):890-895. DOI: 10.21273/JASHS.118.6.890Reed B.M. Implementing cryogenic storage of clonally propagated plants. CryoLetters. 2001;22(2):97-104.Reed B.M. Implementing cryogenic storage of clonally propagated plants. CryoLetters. 2001;22(2):97-104.Reed B.M., Lagerstedt H.B. Effects of prefreezing temperature, freezing rate and cryoprotectants on the survival of apical meristems of Vaccinium frozen in liquid nitrogen. Cryobiology. 1987;24(6):571-572. DOI: 10.1016/0011-2240(87)90135-0Reed B.M., Lagerstedt H.B. Effects of prefreezing temperature, freezing rate and cryoprotectants on the survival of apical meristems of Vaccinium frozen in liquid nitrogen. Cryobiology. 1987;24(6):571-572. DOI: 10.1016/0011-2240(87)90135-0Reed B.M., Sarasan V., Kane M., Bunn E., Pence V.C. Biodiversity conservation and conservation biotechnology tools. In Vitro Cellular and Developmental Biology – Plant. 2011;47:1-4. DOI: 10.1007/s11627-010-9337-0Reed B.M., Sarasan V., Kane M., Bunn E., Pence V.C. Biodiversity conservation and conservation biotechnology tools. In Vitro Cellular and Developmental Biology – Plant. 2011;47:1-4. DOI: 10.1007/s11627-010-9337-0Roque-Borda C.A., Kulus D., Vacaro de Souza A., Kaviani B., Vicente E.F. Cryopreservation of agronomic plant germplasm using vitrification-based methods: An overview of selected case studies. International Journal of Molecular Sciences. 2021;22(11):1-33. DOI: 10.3390/ijms22116157Roque-Borda C.A., Kulus D., Vacaro de Souza A., Kaviani B., Vicente E.F. Cryopreservation of agronomic plant germplasm using vitrification-based methods: An overview of selected case studies. International Journal of Molecular Sciences. 2021;22(11):1-33. DOI: 10.3390/ijms22116157Розанова М.А. Ягодоведение и ягодоводство. 2-е изд. Ленинград: Сельхозгиз, Ленинградское отделение; 1937.Rozanova M.A. Berry studies and berry growing (Yagodovedenie i yagodovodstvo). 2nd ed. Leningrad: Selkhozgiz, Leningrad branch; 1937. [in Russian].Государственный реестр селекционных достижений, допущенных к использованию. Т. 1 «Сорта растений» (официальное издание). Москва: Росинформагротех; 2021. URL: https://ogorodum.ru/docs/gosreestr-rus.pdf [дата обращения: 24.12.2021].State Register for Selection Achievements Admitted for Usage (National List). Vol. 1 “Plant varieties” (official publication). Moscow: Rosinformagrotekh; 2021; 2021. [In Russian]. URL: https://ogorodum.ru/docs/gosreestr-rus.pdf [дата обращения: 24.12.2021].Тихонова О.А., Гаврилова О.А., Радченко Е.А., Вержук В.Г., Павлов А.В. Жизнеспособность пыльцы черной смородины до и после криоконсервирования в жидком азоте и особенности ее морфологии. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2020;181(3):110-119. DOI: 10.30901/2227-8834-2020-3-110-119Tikhonova O.A., Gavrilova O.A., Radchenko E.A., Verzhuk V.G., Pavlov A.V. Viability of black currant pollen before and after cryopreservation in liquid nitrogen, and its morphological features. Proceedings on applied botany, genetics and breeding. 2020;181(3):110-119. [In Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2020-3-110-119Tuohimetsä S., Nukari A. Modified droplet-vitrification cryopreservation of arctic bramble (Rubus arcticus) and hybrid arctic bramble. Acta Horticulture. 2019;1234:225-232. DOI: 10.17660/ActaHortic.2019.1234.30Tuohimetsä S., Nukari A. Modified droplet-vitrification cryopreservation of arctic bramble (Rubus arcticus) and hybrid arctic bramble. Acta Horticulture. 2019;1234:225-232. DOI: 10.17660/ActaHortic.2019.1234.30Uchendu E.E., Muminova M., Gupta S., Reed B.M. Antioxidant and anti-stress compounds improve regrowth of cryopreserved Rubus shoot tips. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2010;46(4):386-393. DOI: 10.1007/s11627-010-9292-9Uchendu E.E., Muminova M., Gupta S., Reed B.M. Antioxidant and anti-stress compounds improve regrowth of cryopreserved Rubus shoot tips. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2010;46(4):386-393. DOI: 10.1007/s11627-010-9292-9Ukhatova Y.V., Dunaeva S.E., Antonova O.Y., Apalikova O.V., Pozdniakova K.S., Novikova L.Y., Shuvalova L.E., Gavrilenko T.A. Cryopreservation of red raspberry cultivars from the VIR in vitro collection using a modified droplet vitrification method. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2017;53:394-401. DOI: 10.1007/s11627-017- 9860-3Ukhatova Y.V., Dunaeva S.E., Antonova O.Y., Apalikova O.V., Pozdniakova K.S., Novikova L.Y., Shuvalova L.E., Gavrilenko T.A. Cryopreservation of red raspberry cultivars from the VIR in vitro collection using a modified droplet vitrification method. In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2017;53:394-401. DOI: 10.1007/s11627-017- 9860-3Volk G.M., Henk A.D., Jenderek M.M., Richards C.M. Probabilistic viability calculations for cryopreserving vegetatively propagated collections in genebanks. Genetic Resources and Crop Evolution. 2017;64(7):1613-1622. DOI: 10.1007/s10722-016-0460-6Volk G.M., Henk A.D., Jenderek M.M., Richards C.M. Probabilistic viability calculations for cryopreserving vegetatively propagated collections in genebanks. Genetic Resources and Crop Evolution. 2017;64(7):1613-1622. DOI: 10.1007/s10722-016-0460-6Vollmer R., Villagaray R., Cárdenas J., Castro M., Chávez O., Anglin N.L., Ellis D. A large-scale viability assessment of the potato cryobank at the International Potato Center (CIP). In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2017;53(4):309-317. DOI: 10.1007/s11627-017-9846-1Vollmer R., Villagaray R., Cárdenas J., Castro M., Chávez O., Anglin N.L., Ellis D. A large-scale viability assessment of the potato cryobank at the International Potato Center (CIP). In Vitro Cellular & Developmental Biology - Plant. 2017;53(4):309-317. DOI: 10.1007/s11627-017-9846-1Vujović T., Ružić D., Cerović R. Effect of the duration of liquid nitrogen storage on the regrowth of blackberry cryopreserved by droplet vitrification. Contemporary Agriculture. 2017;66:44-50. DOI: 10.1515/contagri-2017-0008Vujović T., Ružić D., Cerović R. Effect of the duration of liquid nitrogen storage on the regrowth of blackberry cryopreserved by droplet vitrification. Contemporary Agriculture. 2017;66:44-50. DOI: 10.1515/contagri-2017-0008Vujović T., Sylvestre I., Ružić D., Engelmann F. Droplet-vitrification of apical shoot tips of Rubus fruticosus L. and Prunus cerasifera Ehrh. Scientia Horticulturae. 2011;130(1):222-228. DOI: 10.1016/j.scienta.2011.06.049Vujović T., Sylvestre I., Ružić D., Engelmann F. Droplet-vitrification of apical shoot tips of Rubus fruticosus L. and Prunus cerasifera Ehrh. Scientia Horticulturae. 2011;130(1):222-228. DOI: 10.1016/j.scienta.2011.06.049Vysotskaya O.N., Mochammed A.I., Butenko R.G. Cryopreservation of red raspberry meristems (Rubus idaeus L.) isolated from in vitro plantlets. Biology Bulletin. 1999;26(1):19-22. Available from: https://www.researchgate.net/publication/259417833_Cryopreservation_of_Red_Raspberry_Meristems_Rubus_idaeus_L_Isolated_from_in_vitro_Plantlets [accessed Nov. 23, 2021].Vysotskaya O.N., Mochammed A.I., Butenko R.G. Cryopreservation of red raspberry meristems (Rubus idaeus L.) isolated from in vitro plantlets. Biology Bulletin. 1999;26(1):19-22. Available from: https://www.researchgate.net/publication/259417833_Cryopreservation_of_Red_Raspberry_Meristems_Rubus_idaeus_L_Isolated_from_in_vitro_Plantlets [accessed Nov. 23, 2021].Высоцкая О.Н., Попов А.С. Способ криосохранения меристем, изолированных из растений малины красной (Rubus idaeus L.) in vitro. Российская Федерация; патент на изобретение № 2248121; 2005.Vysotskaya O.N., Popov A.S. Method of cryogenic in vitro keeping meristems isolated from red raspberry plants. Russian Federation; invention patent number: 2248121; 2005. [In Russian].Wang Q., Laamanen J., Uosukainen M., Valkonen J.P.T. Cryopreservation of in vitro-grown shoot tips of raspberry (Rubus idaeus L.) by encapsulation–vitrification and encapsulation–dehydration. Plant Cell Reports. 2005;24:280-288. DOI: 10.1007/s00299-005-0936-xWang Q., Laamanen J., Uosukainen M., Valkonen J.P.T. Cryopreservation of in vitro-grown shoot tips of raspberry (Rubus idaeus L.) by encapsulation–vitrification and encapsulation–dehydration. Plant Cell Reports. 2005;24:280-288. DOI: 10.1007/s00299-005-0936-x

The authors declare that there are no conflicts of interest present.