bioselБиотехнология и селекция растенийPlant Biotechnology and Breeding2658-62662658-6258VIR10.30901/2658-6266-2022-3-o3biosel-166Research ArticleРАЗВИТИЕ СОВРЕМЕННЫХ МЕТОДОВ СЕЛЕКЦИИDEVELOPMENT OF MODERN BREEDING METHODSДоноры ультраскороспелости в селекции яровой мягкой пшеницыDonors of ultra-earliness for spring common wheat breedinghttps://orcid.org/0000-0001-9848-5795РигинБ. В.RiginB. V.

Борис Викторович Ригин, доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник, отдел генетики

190000, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Boris V. Rigin, Dr. Sci (Biology), Professor, Leading Researcher, Department of Genetics

42, 44, Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000

riginbv@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-6094-962XШрейдерЕ. Р.ShreyderE. R.

Екатерина Робертовна Шрейдер, кандидат сельскохозяйственных наук, ведущий научный сотрудник, лаборатория селекции яровой пшеницы

456404, Челябинская область, Чебаркульский район, поселок Тимирязевский, ул. Чайковского, 14

Ekaterina R. Shreyder, Cand. Sci. (Agriculture), Leading Researcher, Spring Wheat Breeding Laboratory 

14, Tchaikovsky street, village of Timiryazevsky, district Chebarkul, Chelyabinsk region, 456404

shreyder11@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0001-8233-5047МатвиенкоИ. И.MatvienkoI. I.

Инна Ивановна Матвиенко, научный сотрудник, отдел генетики

190000, г. Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Inna I. Matvienko, Researcher, Department of Genetics

42, 44, Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000

181947@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-6754-2897АндрееваА. С.AndreevаA. S.

Анна Сергеевна Андреева, младший научный сотрудник, отдел генетических ресурсов пшеницы

90000, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Anna S. Andreevа, Researcher, Department of Wheat Genetic Resources

42, 44, Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000

 

karandash_85@inbox.ruhttps://orcid.org/0000-0001-9259-4384ЗуевЕ. В.ZuevE. V.

Евгений Валерьевич Зуев, кандидат сельскохозяйственный наук, ведущий научный сотрудник, и.о. заведующего отделом, отдел генетических ресурсов пшеницы

190000, Санкт-Петербург, ул. Большая Морская, 42, 44

Evgeniy V. Zuev, Cand. Sci. (Agriculture), Leading Researcher, Acting Head of Wheat Department

42, 44, Bolshaya Morskaya Street, St. Petersburg 190000

e.zuev@vir.nw.ruФедеральный исследовательский центр Всероссийский институт генетических ресурсов растений имени Н.И. Вавилова (ВИР)N.I. Vavilov All-Russian Institute of Plant Genetic ResourcesЧелябинский научно-исследовательский институт сельского хозяйстваChelyabinsk Research Institute of Agriculture20221911202253514Copyright © Ригин Б.В., Шрейдер Е.Р., Матвиенко И.И., Андреева А.С., Зуев Е.В., 20222022Ригин Б.В., Шрейдер Е.Р., Матвиенко И.И., Андреева А.С., Зуев Е.В.Rigin B.V., Shreyder E.R., Matvienko I.I., Andreevа A.S., Zuev E.V.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://biosel.elpub.ru/jour/article/view/166

Знания о продуктивности и генетическом контроле скорости развития ультраскороспелых линий будут способствовать эффективному их использованию в селекции мягкой пшеницы Tritium aestivum L. на высокую адаптивную способность. Исследовали ультраскороспелые линии Рико (k-65588), Римакс (k-67257), (происходящие от F3  Rico × ‘Max’, k-57181), серии линий Фори 1-8 (происхождение от F4  ‘Photon’ × Rico) и Рифор 1-13, (происходящие от F7-8 Rico × ‘Forlani Roberto’), а также образцы ‘Фотон’ (k-55696), ‘Forlani Roberto’ (k-42641). В качестве стандартов в ВИР использовали сорта ‘Ленинградская 6’ (k-64900) и ‘Ленинградская 97’ (k-62935), в ЧНИИСХ – ‘Челяба 2’ (k-64379). Аллели генов Vrn и Ppd идентифицировали ПЦР-анализом c использованием опубликованных аллель-специфичных праймеров. Реакция на яровизацию (30 суток при 3°С) и на короткий 12-часовой день определена по методике ВИР. Ультраскороспелость линий мягкой пшеницы ассоциирована с наличием доминантных аллелей Vrn-A1, Vrn-B1, Vrn-D1, Ppd-B1 и Ppd-D1. Самый короткий период всходы-колошение в двух пунктах анализа отмечен у Рико – 39,9 ± 1,49 суток, что меньше, чем у районированных сортов на 14,8 ± 1,22 суток. Генотип Рико: Vrn-A1, Vrn-B1, Vrn-D1, Ppd-B1 и Ppd-D1. В генотипе Римакс найдены разные аллели генов Ppd-D1 и Vrn-B1, вероятно образовавшиеся в результате рекомбинационных процессов у гибридов Рико × ‘Max’. На фоне короткого фотопериода (12 часов) гены Рико и Римакс могут взаимодействовать по типу кумулятивной полимерии, что не наблюдается в условиях длинного дня. В отличие от других линий Рифор, линии Рифор 4 и Рифор 5, как и образец ‘Forlani Roberto’ обладают рецессивным аллелем vrn-A1a. Однако Рифор 4 и Рифор 5 на яровизацию не реагируют, а ‘Forlani Roberto’ отзывается на этот фактор. Возможно отсутствие реакции на яровизацию у Рифор 4 и Рифор 5, с рецессивным аллелем vrn-A1a, обеспечивается комплексом генов-модификаторов наряду с доминантным геном Vrn-D1, который сформировался в процессе генетической рекомбинации у гибридов F7-8 Рико × ‘Forlani Roberto’. Выделены рекомбинанты яровой мягкой пшеницы, сочетающие ультраскороспелость и сравнительно высокую продуктивность колоса. Урожай зерна с 1 м2  посевов новых ультраскороспелых линий в отдельные годы может достигать 90% от урожая сорта ‘Ленинградская 97’. Ультраскороспелые линии целесообразно использовать в качестве доноров высокой скорости развития в селекции мягкой пшеницы с учетом их генетических особенностей.

Knowledge of productivity and genetic control of the rate of ultra-early lines development will facilitate their use in breeding of common wheat Tritium aestivum L. for high adaptive capacity. The research focused on ultra-early lines Rico (k-65588), Rimax (k-67257) (progeny of F3  Rico × ‘Max’, k-57181), Fori 1-8 line series (progeny of F4  ‘Photon’ × Rico) and Rifor 1-13 (progeny of F7-8 Rico × ‘Forlani Roberto’), as well as on the accessions ‘Photon’ (k-55696) and ‘Forlani Roberto’ (k-42641). The varieties ‘Leningradskaya 6’ (k-64900) and ‘Leningradskaya 97’ (k-62935) were used as standards in VIR, and ‘Chelyaba 2’ (k-64379) was used in Сhelyabinsk ARI. The alleles of Vrn and Ppd genes were identified by PCR using the published allele-specific primers. Responses to vernalization (30 days at 3°C) and to a short 12-hour day were determined according to the VIR guidelines. The ultra-earliness of common wheat lines is associated with the presence of dominant alleles Vrn-A1, Vrn-B1, Vrn-D1, Ppd-B1, Ppd-D1, and possibly Eps. The shortest emergence-to-heading period at two experimental locations was noted for Rico (39.9 ± 1.49 days), which is 14.8 ± 1.22 days earlier than the development of region-adapted varieties. The Rico genotype contains Vrn-A1, Vrn-B1, Vrn-D1, Ppd-B1 and Ppd-D1. In the Rimax genotype, different alleles of the Ppd-D1 and Vrn-B1 genes were found, possibly being a result of recombination processes in Rico × ‘Max’ hybrids. Under a short photoperiod (12 hours), the Rico and Rimax genes can interact in a cumulative polymeric mode, which is not the case in long-day environments. Unlike other Rifor lines, Rifor 4 and Rifor 5, as well as ‘Forlani Roberto’, have a recessive vrn-A1a allele. However, Rifor 4 and Rifor 5 do not respond to vernalization, while ‘Forlani Roberto’ is responsive to this factor. The absence of response to vernalization in Rifor 4 and Rifor 5 possessing the recessive vrn-A1a allele is possibly provided by a complex of modifier genes along with the dominant Vrn-D1 gene, which was formed during recombination in F7-8 Rico × ‘Forlani Roberto’ hybrids. Recombinants of spring common wheat, combining ultra-earliness and relatively high ear productivity, have been identified. Grain yield per 1 m2  of new ultra-early lines in some years can reach 90% of that of the ‘Leningradskaya 97’. It is expedient to use ultra-early lines as donors of high-rate development in common wheat breeding, considering genetic peculiarities of the source lines.

Triticum aestivum L.ультраскороспелостьреакция на яровизациюфотопериодэлементы продуктивностивзаимодействие геновTriticum aestivum L.ultra-early maturityresponse to vernalizationphotoperiodproductivity elementsgene interactionReferencesАнисимова И.Н., Алпатьева Н.В., Абдуллаев Р.А., Карабицина Ю.И., Кузнецова Е.Б. Скрининг генетических ресурсов растений с использованием ДНК-маркеров: основные принципы, выделение ДНК, постановка ПЦР, электрофорез в агарозном геле: (методические указания) / под ред. Е.Е. Радченко. Санкт-Петербург: ВИР; 2018. DOI: 10.30901/978-5-905954-81-8Anisimova I.N., Alpatyeva N.V., Abdullaev R.A., Karabitsina Yu.I., Kuznetsova E.B. Screening of plant genetic resources with the use of DNA markers: basic principles, DNA isolation, PCR setup, agarose gel electrophoresis: (guidelines). E.E. Radchenko (ed.). St. Petersburg: VIR; 2018. DOI: 10.30901/978-5-905954-81-8Beales J., Turner A., Griffiths S., Snape J., Laurie D. A pseudo response regulator is misexpressed in the photoperiod insensitive Ppd-D1a mutant of wheat (Triticum aestivum L.). Theoretical and Applied Genetics. 2007;115(5):721-733. DOI: 10.1007/s00122-007-0603-4Beales J., Turner A., Griffiths S., Snape J., Laurie D. A pseudo response regulator is misexpressed in the photoperiod insensitive Ppd-D1a mutant of wheat (Triticum aestivum L.). Theoretical and Applied Genetics. 2007;115(5):721-733. DOI: 10.1007/s00122-007-0603-4Cockram J., Jones H., Leigh F.J., O'Sullivan D., Powell W., Laurie D.A., Greenland A.J. Control of flowering time in temperate cereals: genes, domestication, and sustainable productivity. Journal of Experimental Botany. 2007;58(6):1231-1244. DOI: 10.1093/jxb/erm042Cockram J., Jones H., Leigh F.J., O'Sullivan D., Powell W., Laurie D.A., Greenland A.J. Control of flowering time in temperate cereals: genes, domestication, and sustainable productivity. Journal of Experimental Botany. 2007;58(6):1231-1244. DOI: 10.1093/jxb/erm042Fu D., Szucs P., Yan L., Helguera M., Skinner J.S., von Zitzewitz J., Hayes P.M., Dubcovsky J. Large deletions within the first intron in VRN-1 are associated with spring growth habit in barley and wheat. Molecular Genetics and Genomics. 2005;273(1):54-65. DOI: 10.1007/s00438-004-1095-4Fu D., Szucs P., Yan L., Helguera M., Skinner J.S., von Zitzewitz J., Hayes P.M., Dubcovsky J. Large deletions within the first intron in VRN-1 are associated with spring growth habit in barley and wheat. Molecular Genetics and Genomics. 2005;273(1):54-65. DOI: 10.1007/s00438-004-1095-4Herndl M. White J.W., Graeff S., Claupein W. The impact of vernalization requirement, photoperiod sensitivity and earliness per se on grain protein content of bread wheat (Triticum aestivum L.). Euphytica. 2008;163:309-320. DOI: 10.1007/s10681-008-9671-zHerndl M. White J.W., Graeff S., Claupein W. The impact of vernalization requirement, photoperiod sensitivity and earliness per se on grain protein content of bread wheat (Triticum aestivum L.). Euphytica. 2008;163:309-320. DOI: 10.1007/s10681-008-9671-zГончаров Н.П. Генетический контроль фотопериодической чувствительности у мягкой пшеницы. Научно-технический бюллетень Всесоюзного научно-исследовательского института растениеводства им. Н.И. Вавилова. 1987;174:7-11.Goncharov N.P. Genetic control of photoperiodic sensitivity in soft wheat. Research Bulletin of the N.I. Vavilov Institute of Plant Industry. 1987;174:7-11. [In Russian]Гончаров Н.П. Сравнительная генетика пшениц и их сородичей. Новосибирск: Сибирское университетское издательство; 2002.Goncharov N.P. Comparative genetics of wheats and their related species. V.K. Shumny [ed.]. Novosibirsk: Siberian University Press; 2002. [in Russian]Kamran A., Iqbal M., Navabi A., Randhawa H., Pozniak C., Spaner D. Earliness per se QTLs and their interaction with the photoperiod insensitive allele Ppd-D1a in the Cutler 3 AC Barrie spring wheat population. Theoretical and Applied Genetics. 2013;126:1965-1976. DOI: 10.1007/s00122-013-2110-0Kamran A., Iqbal M., Navabi A., Randhawa H., Pozniak C., Spaner D. Earliness per se QTLs and their interaction with the photoperiod insensitive allele Ppd-D1a in the Cutler 3 AC Barrie spring wheat population. Theoretical and Applied Genetics. 2013;126:1965-1976. DOI: 10.1007/s00122-013-2110-0Kamran A., Iqbal M., Spaner D. Flowering time in wheat (Triticum aestivum L.): a key factor for global adaptability. Euphytica. 2014;197(1):1-26. DOI: 10.1007/s10681-014-1075-7Kamran A., Iqbal M., Spaner D. Flowering time in wheat (Triticum aestivum L.): a key factor for global adaptability. Euphytica. 2014;197(1):1-26. DOI: 10.1007/s10681-014-1075-7Kiseleva A.A., Salina E.A. Genetic regulation of common wheat heading time. Russian Journal of Genetics. 2018;54(4):375-388. DOI: 10.1134/S1022795418030067Kiseleva A.A., Salina E.A. Genetic regulation of common wheat heading time. Russian Journal of Genetics. 2018;54(4):375-388. DOI: 10.1134/S1022795418030067Кошкин В.А. Методические подходы в диагностике фотопериодической чувствительности и скороспелости растений. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2012;170:118-129.Koshkin V.A. Methodological approaches in the diagnosis of photoperiodic sensitivity and early maturation of plants. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding; 2012;70:118-129. [In Russian]Meng L.Z., Liu H.W., Yang L., Mai C.Y., Yu L.Q., Li H.J., Zhang H.J., Zhou Y. Effects of the Vrn-D1b allele associated with facultative regrowth habit on agronomic traits in common wheat. Euphytica. 2016;211:113-122. DOI: 10.1007/s10681-016-1747-6Meng L.Z., Liu H.W., Yang L., Mai C.Y., Yu L.Q., Li H.J., Zhang H.J., Zhou Y. Effects of the Vrn-D1b allele associated with facultative regrowth habit on agronomic traits in common wheat. Euphytica. 2016;211:113-122. DOI: 10.1007/s10681-016-1747-6Пискарев В.В., Зуев Е.В., Брыкова А.Н. Исходный материал для селекции яровой мягкой пшеницы в условиях Новосибирской области. Вавиловский журнал генетики и селекции. 2018;22(7):784-794. DOI 10.18699/VJ18.422Piskarev V.V., Zuev E.V., Brykova A.N. Sources for the breeding of soft spring wheat in the conditions of Novosibirsk region. Vavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii = Vavilov Journal of Genetics and Breeding. 2018;22(7):784-794. [In Russian]. DOI 10.18699/VJ18.422Потокина Е.К., Кошкин В.А., Алексеева Е.А., Матвиенко И.И., Филобок В.А., Беспалова Л.А. Сочетание аллелей генов Ppd и Vrn определяет срок колошения у сортов мягкой пшеницы. Вавиловский журнал генетики и селекции. 2012;2(4):311-318. DOI: 10.1134/S2079059712040089Potokina E.K., Koshkin V.A., Alekseeva E.A., Matvienko I.I., Filobok V.А., Bespalova L.A. The combination of the Ppd and Vrn gene alleles determines the heading date in common wheat varieties. Vavilov Journal of Genetics and Breeding. 2012;2(4):311-318. [In Russian]. DOI: 10.1134/S2079059712040089Ригин Б.В. Яровой тип развития мягкой пшеницы (Triticum aestivum L.): фенологический и генетический аспекты. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2012;170:17-33.Rigin B.V. Spring type of development of common wheat (Triticum aestivum L.): phenological and genetic aspects. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2012;170:17-33. [In Russian]Ригин Б.В., Зуев Е.В., Тюнин В.А., Шрейдер Е.Р., Пыженкова З.С., Матвиенко И.И. Селекционно-генетические аспекты создания продуктивных форм мягкой яровой пшеницы с высокой скоростью развития. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2018;179(3):194-202. DOI: 10.30901/2227-8834-2018-3-194-202Rigin B.V., Zuev E.V., Tyunin V.A., Schreider E.R., Pyzhenkova Z.S., Matvienko I.I. Breeding and genetic aspects of creating productive forms of fast-developing spring bread wheat. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2018;179(3):194-202. [In Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2018-3-194-202Ригин Б.В., Зуев Е.В., Андреева А.С., Пыженкова З.С., Матвиенко И.И. Линия Рико – самая скороспелая среди представителей коллекции яровой мягкой пшеницы ВИР. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2019;180(4):94-98. DOI: 10.30901/2227-8834-2019-4-94-98Rigin B.V., Zuev E.V., Andreeva A.S., Pyzhenkova Z.S., Matvienko I.I. The line Rico is the earliest maturing accession in the VIR collection of spring bread wheat. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2019;180(4):94-98. [In Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2019-4-94-98Ригин Б.В., Зуев Е.В., Андреева А.С., Матвиенко И.И., Пыженкова З.С. Сравнительный анализ наследования высокой скорости развития линий Римакс и Рико яровой мягкой пшеницы Triticum aestivum L. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2021a;182(2):1-8. DOI: 10.30901/2227-8834-2021-2-1-8Rigin B.V., Zuev E.V., Andreeva A.S., Matvienko I.I., Pyzhenkova Z.S. Comparative analysis of the inheritance of a high development rate in the Rimax and Rico lines of spring bread wheat (Triticum aestivum L.). Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2021a;182(2):1-8. [In Russian]. DOI: 10.30901/2227-8834-2021-2-1-8Ригин Б.В., Зуев Е.В., Матвиенко И.И., Андреева А.С. Молекулярное маркирование генов Vrn, Ppd и реакция на яровизацию ультраскороспелых линий яровой мягкой пшеницы Triticum aestivum L. Биотехнология и селекция растений. 2021b;4(3):26-36. DOI: 10.30901/2658-6266-2021-3-o2Rigin B.V., Zuev E.V., Matvienko I.I., Andreeva A.S. Molecular labeling of Vrn, Ppd genes and vernalization response of the ultra-early lines of spring bread wheat Triticum aestivum L. Plant Biotechnology and Breeding. 2021b;4(3):26-36. [In Russian]. DOI: 10.30901/2658-6266-2021-3-o2Shcherban A.B., Efremova T.T., Salina E.A. Identification of a new Vrn-B1 allele using two near-isogenic wheat lines with difference in heading time. Molecular Breeding. 2012;29(3):675-685. DOI: 10.1007/s11032-011-9581-yShcherban A.B., Efremova T.T., Salina E.A. Identification of a new Vrn-B1 allele using two near-isogenic wheat lines with difference in heading time. Molecular Breeding. 2012;29(3):675-685. DOI: 10.1007/s11032-011-9581-yСмирнова О.Г., Пшеничникова Т.А. Связь между генетическим статусом локуса Vrn-1 и размером корневой системы мягкой пшеницы (Triticum aestivum L.). Вавиловский журнал генетики и селекции. 2021;25(8):805-811. DOI: 10.18699/VJ21.093Smirnova O.G., Pshenichnikova T.A. Relationship between the genetic status of the Vrn-1 locus and the size of the root system of common wheat (Triticum aestivum L.). Vavilov Journal of Genetics and Breeding. 2021;25(8):805-811. [In Russian]. DOI: 10.18699/VJ21.093Sun D., Fung J., Sun J. Inheritance of genes controlling supernumerary spikelet in wheat line 51885. Euphytica. 2009;167(2):173-179. DOI: 10.1007/s10681-008-9854-7Sun D., Fung J., Sun J. Inheritance of genes controlling supernumerary spikelet in wheat line 51885. Euphytica. 2009;167(2):173-179. DOI: 10.1007/s10681-008-9854-7Tan C.N., Yan L. Duplicated, deleted and translocated VRN2 genes in hexaploid wheat. Euphytica. 2016;208:277-284. DOI: 10.1007/s10681-015-1589-7Tan C.N., Yan L. Duplicated, deleted and translocated VRN2 genes in hexaploid wheat. Euphytica. 2016;208:277-284. DOI: 10.1007/s10681-015-1589-7Yan M., Helguera M., Kato K., Fukuyama S., Sherman J., Dubcovsky J. Allelic variation at the VRN1 promoter region in polyploid wheat. Theoretical and Applied Genetics. 2004;109(8):1677-1686. DOI: 10.1007/s00122-004-1796-4Yan M., Helguera M., Kato K., Fukuyama S., Sherman J., Dubcovsky J. Allelic variation at the VRN1 promoter region in polyploid wheat. Theoretical and Applied Genetics. 2004;109(8):1677-1686. DOI: 10.1007/s00122-004-1796-4Зайцев Г.Н. Математическая статистика в экспериментальной ботанике. Москва: Наука; 1984.Zaitsev G.N. Mathematical statistics in experimental botany (Matematicheskaya statistika v eksperimentalnoy botanike). Moscow: Nauka; 1984. [In Russian]Злотина М.М., Киселева А.А., Потокина Е.К. Использование аллель-специфичных маркеров генов Vrn и Ppd для экспресс-диагностики фотопериодической чувствительности и потребности в яровизации мягкой пшеницы и ячменя. Методические указания. Санкт-Петербург: ВИР; 2012.Zlotina M.M., Kiseleva A.A., Potokina E.K. The use of allele-specific markers of the Vrn and Ppd genes for express diagnostics of photoperiod sensitivity and the need for vernalization in common wheat and barley. Methodical instructions. St. Petersburg: VIR; 2012. [In Russian]Зуев Е.В., Брыкова А.Н., Никонов В.И., Захаров В.Г., Терехин М.В., Потокина С.А., Иванова В.С., Россеева Л.П., Зырянова А.Ф., Сюков В.В., Ботоев Б.Б., Лихенко И.Е., Моисеенко Л.М. Результаты изучения коллекции яровой мягкой пшеницы на скороспелость в селекцентрах России. Труды по прикладной ботанике, генетике и селекции. 2009;166:101-106.Zuev E.V., Brykova A.N., Nikonov V.I., Zakharov V.G., Terekhin M.V., Potokina S.A., Ivanova V.S., Rosseeva L.P., Zyryanova AF., Syukov V.V., Botoev B.B., Likhenko I.E., Moiseenko L.M. Results of studying the collection of spring soft wheat for early maturity in breeding centers of Russia. Proceedings on Applied Botany, Genetics and Breeding. 2009;166:101-106. [In Russian]

The authors declare that there are no conflicts of interest present.